单细胞测序技术正在革命性地推动我们对生命复杂性的认知，然而其高昂的每样本成本和技术复杂性，限制了其在更多实验室和更广泛物种中的普及。尽管多重样本标记技术能有效“降本增效”，但现有的方法往往受限于抗原种类活性聊天、寡核苷酸掩盖直接费用很高或运行过程较为复杂。近日，南方海洋科学与工程广东实验室（广州）的陈凯教援项目团队在Journal of Genetics and Genomics上发表了一项创新性方法学研究，提出了一种名为HEATag的新型样本标记策略，为我们提供了一个低费用、跨种类、全软件兼容的全新解决方案。

论文期刊简单

Journal of Genetics and Genomics (JGG)是由国内 学科院基因基因隔代显性基因规律与生长发育动物工程学论述所和国内 基因基因隔代显性基因规律自学主办单位的国际级学术研究讨论论文杂志，努力于报道范文生命安全学科和医疗基因基因隔代显性基因规律学业务各个范畴的亿人性论述拜谱生物。JGG 202几年度损害细胞因子7.1，Scopus学术研究讨论论文杂志评测指标体系CiteScore 9.9，位于JCR 202几年度GENETICS & HEREDITY业务各个范畴Q1区(Top 10%)，BIOCHEMISTRY & MOLECULAR BIOLOGY业务各个范畴Q1区，位于国内 学科院论文杂志系统分割动物工程学大类别1区(Top论文杂志)，基因基因隔代显性基因规律学和生化模式与原子核动物工程学小类双1区。

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哪些是HEATag

委婉的“二合二为一”方案

HEATag是由凝集素和HUH内切酶造成的整合蛋清

「市场定位器」板块 - 凝集素

能够识别细胞膜上广泛存在且高度保守的糖基化呈现（如GlcNAc和Neu5Ac）。

「连到器」版块 - HUH内切酶

可以序列特异性地与普通的、无需化学修饰的单链DNA（ssDNA）目录长条形码查询使用共价联接。

“1+1>2”的实际效果：将两者融合，得到的HEATag蛋白既能通过凝集素牢牢锚定在细胞膜上，又能通过HUH蛋白携带特定的DNA条形码进行模本标上与追溯。

Fig1: HEATag多个标志方法示幼儿小班教案图

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入门开展

HEATag应该有点能打？

可能在各种先决条件下，实现了辅乳期昆虫神经元系单神经元混样测序

实验室里的设计再精妙，也要经过真实样本的 “实战考验” 才算数。研究探讨团体为 HEATag 装置了多轮 “心理比较稳界定测试仪”，从神经元系到神经元核，从超底温到底温，从新鲜样品到特定样品，全地方手机验证它的比较稳界定和安全性。

首先轮测评专门针对哺乳期间昆虫人体受损细胞膜系：探析员选购了来于人、鼠、仓鼠八个鱼类的4类人体受损细胞膜（HEK293T、K562、MEF、CHO），在高温下使用 HEATag 标识后相溶测序。后面回收分类处理的 11447 个人体受损细胞膜中，85.66% 都能经由 HEATag 长条码准确度匹配好到原鱼类，范本间交叉性环境破坏很少，UMAP 聚类讲解讲解也是同时证明格式，HEATag 长条码与鱼类特情人染色体组特征英文长度一直。 紧接着，检测必要前提进第一步自动升级：钻研职工成功在 4℃下符号丰富体生殖受损受损细胞膜、在制冷下符号甲醇确定体生殖受损受损细胞膜，有的同时符号体生殖受损受损细胞膜核。效果仍然醒目：每个必要前提下，样表标示与鱼类信息查询均都具有最好的关于性，分割确切率超 95%。纵使甲醇确定会造成的经微的转录本重叠污染源，体生殖受损受损细胞膜核制取有少量的 RNA 流动，体生殖受损受损细胞膜内型的引用效果仍然与丰富样表恢复相同，发现 HEATag 能否符号不同于处里必要前提下的工作样表。

Fig2: HEATag 可在各种不同條件下成功完成单細胞转录组混样介绍

才能标记符号哺乳期小宠物和深海无脊梁骨小宠物的原代受损细胞

如若说血神经细胞系检测是 “基础知识题”，那公司范例是 “额外添加题”， 以上范例一般情况下因血神经细胞品类繁杂、氛围不均衡性唯一性，当上标识技术性的 “常见问题”，而 HEATag 恰巧在以上 “常见问题” 上展示了优质。

研究团队选择了大鼠和小鼠的睾丸进行，这类样本包含精原干细胞、精母细胞、精子细胞等多种类型，对标记一致性的要求极高。实验中，两种动物的睾丸用特异性 HEATag 条形码标记后混合测序，最终获得的 14663 个细胞一方面能被明确分清，任何基本组织细胞型号的聚类分析报告都明了可辨。

更令人惊喜的是HEATag对深海海洋生物的替换性。HEATag能在海水的等渗溶液中标记新鲜的海洋动物细胞（如海月水母、大西洋海刺水母）。研究人员用人工海水稀释的HEATag 标记了水母和珊瑚的组织细胞后在 BD Rhapsody 平台测序，最终回收的 6452 个细胞中，HEATag 条状码与植物物种转录组享有较高相同性，如果没有出来因高盐条件致使的 “符号就失效”。后续对甲醇固定的海洋生物细胞测试结果显示，HEATag 在固定样本中的拆分效果优于新鲜样本。

Fig3: HEATag 可构建母乳喂奶宠物组织安排范本各种方面 scRNA-seq 深入分析

Fig4: HEATag可达成剥好海洋环境无脊梁骨宠物诸多 scRNA-seq 剖析

HEATag与人体细胞的通过不要所致转录组的偏态转变

对样本标记技术来说，“不影响样本本身的 RNA 特征” 是底线。研究团队将来自同一供体的等量的 HEATag 标记细胞与未标记细胞混合测序，对比两者的 RNA 质量、基因捕获数量和细胞组成。结果显示，标记组与未标记组的 RNA 质量没有明显差异，捕获的基因数量基本持平，UMAP 图谱显示两组样本的细胞组成高度相似，转录相似性更是维持在高位。无论是细胞簇的注释结果，还是不同细胞类型的基因回收数量，两组都几乎一致，没有出现 “标记导致的基因表达异常”。这意味着，HEATag在来完成标记符号主线任务的还，不可能对后期的的转录类物质析构成影响，衡量了探索数值的准确性性。

Fig5: HEATag不易印象模板的 RNA 表达方法经济模式

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未来的发展可期

HEATag 能为单神经元探讨引致哪个？

HEATag 的价格，远不止有于 “很好解决标识方面”，它的灵敏性和共通性，目前在为单神经细胞探索开放比较多应该性

从选用景象分析

HEATag 能遮盖从 “方便比效解析”（如癌阻止与日常阻止、性药物加工处理与照表）到 “大投资投资额科研开发”（如阻止组织细胞膜图谱制作、高通骁龙量淘汰）的全范畴要。因为 PIP-seq、Stereo-cell 等新枝术可拓展枝术的转型，HEATag 还能进几步提高自己单组织细胞膜科研开发的通量，推助科研开发团队合作开发较大投资投资额的工程项目。

从跨范围竞争力看到

HEATag 仅仅采主要用于转录组学，还能与表观DNA组学、蛋清质组学、面积组学等科技水平组合，进行个性目录和寡核苷酸回文序列，HEATag 就能够快些渗透不同的的组学流程步骤，不会影响预警捉捕广度。此外，鉴于HEATag还就能够发展前景单細胞糖组学分析科技水平。

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媒体合作动态信息

拜谱海洋生物与陈凯先生达到阶段性加盟有意向的

不错注意的是，在 HEATag 高技術性增添出巨型适用潜能的历史背景下，拜谱微生物制品制品已与南边海洋环境能地理学与工作的江苏科学试验室（东莞）陈凯专家教授已达成最初的合作相关。两者策划把握 HEATag 高技術性的服务业化洛地、钻研工作的图片转换等方法绘制进一步优势互补，力促某一成本控制投入、跨鱼类的单上皮神经元标识高技術性速度快适用于其实钻研工作的场面，为更好地科学试验室给予有效、成本的单上皮神经元钻研方式，推动钻研工作的工作的者在上皮神经元微生物制品制品学、海洋环境能微生物制品制品学、症状机理等这个领域达成更好地翻过