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2024年12月，南京医科大学李晶等团队在Journal of Extracellular Vesicles（IF=15.5）上发表了“Distinct molecular properties and functions of small EV subpopulations isolated from human umbilical cord MSCs using tangential flow filtration combined with size exclusion chromatography”的研究论文。该论文提供了一种切向流过滤（TFF）结合尺寸排阻色谱（SEC）的方法来大规模分离和纯化源自人脐带间充质干细胞（HucMSCs）的sEVs亚群。S1-sEVs和S2-sEVs在大小、膜标记蛋白和携带物方面表现出稳定的变化，通过体外实验和动物疾病模型，研究人员验证了S1-sEVs和S2-sEVs的不同功能。S1-sEVs表现出更强的免疫调节作用，而S2-sEVs则在促进细胞增殖和血管生成方面表现出更强的能力。这种方法为针对不同MSCs适应症的靶向治疗干预提供了可能。拜谱生物技术为该研究提供了蛋白酶组学拜谱生物。
英语怎么说题目：Distinct molecular properties and functions of small EV subpopulations isolated from human umbilical cord MSCs using tangential flow filtration combined with size exclusion chromatography
展现刊物：Journal of Extracellular Vesicles
作用要素：15.5
提出时间段：2024.12.7
写作者公司的：南京医科大学
组学枝术：miRNA测序、淀粉酶组学（拜谱生物体保证）
研究探讨原料：外泌体
设计行车路线：
一、探究数据
01、使用将TFF与SEC设计相配合来分离处理sEVs亚群和HucMSCs
是为了体现适用临床检验应运的MSC-sEVs的大人数制造，写小说作者选取打了个种将TFF与SEC相互结合起来的策略，从HucMSCs的生活条件培训基中分发型离和纯化sEVs。按照血清质印子、NTA进行分析、纳流生殖细胞术的效果表述隔离的2个峰能够是指了sEVs的2个差异亚群。写小说作者将相对应于这2个峰峰值的sEVs亚群主要起名为S1-sEVs和S2-sEVs（图1）。
图1：TFF配合SEC系統从HucMSCs中分发型离和研究方法sEVs亚群
02、MSC-sEVs亚群的表现
sEVs标志物的差异表达意味着它们可能具有不同的内容或功能。为了表征MSC-sEVs亚群的异质性，首先使用蛋白酶组学分析。总共在S1和S2-sEVs亚群中分别鉴定出1326和1246个蛋白质，其中447个蛋白质在S1-sEVs中高度表达，127个蛋白质在S2-sEVs中富集（图2a）。KEGG分析表明，蛋白酶体途径是S1-sEVs富集蛋白中最富集的通路，而代谢途径在S2-sEVs中显示出最高水平的富集（图2b）。除此之外，还发现S1-sEVs中生长因子受体的富集，例如表皮生长因子受体（EGFR）、肝细胞生长因子受体（HGFR）、成纤维细胞生长因子受体1（FGFR1）等。然而，在S2-sEVs中，枢纽蛋白与代谢、糖酵解和缺氧诱导因子1（HIF-1）信号通路密切相关（图2c-h）。这说明了S1-sEVs和S2-sEVs在靶细胞活动的调节中可能具有不同的作用。
图2：两人sEVs亚群的蛋白酶质组学研究分析
为了探索sEVs亚群中的其他分子，作者进行了miRNA测序，并在S1-sEVs和S2-sEVs中分别鉴定了173和79个miRNA两个sEVs亚群之间的差异表达miRNA，其中在S1-sEVs中发现了113个独特的miRNA，而在S2-sEVs中仅发现了19个miRNA（图3a-b）。通过qRT-PCR验证了在S1-sEVs或S2-sEVs中富集的代表性miRNA，包括let-7b-5p、miR-155-5p、let-7c-5p、miR-9-5p和miR-30d-5p（图3c-g）。在S1-sEVs中，核心节点靶基因包括酪氨酸3-单加氧酶/色氨酸5-单加氧酶激活蛋白zeta（YWHAZ）、BTB结构域和CNC同源物1（BACH1）、丛蛋白D1（PLXND1）、高迁移率组AT-hook1（HMGA1）、SMAD家族成员2（SMAD2）、IL6、IL6R 和转化生长因子β受体1（TGFBR1).在S2-sEVs中，核心节点靶基因被鉴定为PR/SET结构域1（PRDM1）、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A（CDKN1A）、原纤维蛋白2（FBN2）、Notch受体1（NOTCH1）、KLF转录因子6（KLF6）和贝克蛋白1（BECN1）。GO分析显示S1-sEVs组靶基因中与细胞内蛋白质转运、染色质或组蛋白修饰相关的丰富生物过程，而S2-sEVs组靶基因中富含细胞增殖或代谢相关生物过程的负调控（图3h-j）。KEGG通路分析，发现S1-sEVs的miRNAs靶基因在与RNA转运或贴壁连接等相关的信号通路中更富集，而S2-sEVs中的miRNAs靶基因在丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）和Wingless/Integrated（WNT）信号通路中更富集（图3k）。
图3：两只sEVs亚群的miRNA谱
03、S1-sEVs和S2-sEVs对体体细胞增值和巨噬体体细胞极化的的差异调空
因为两位sEVs亚群的的不一随身携带物分为，研究探讨进一点分用几种的不一极量的S1-sEVs或S2-sEVs致力于3T3体生殖组织或用脂多糖（LPS）加工小鼠骨髓原因的巨噬体生殖组织（BMDMs）。导致发现S1-sEVs和S2-sEVs对体生殖组织滋生和裂变浓度体现出的不一的应响，有时候对巨噬体生殖组织极化的本事存在的对比分析（图4a-p）。
图4：S1-sEVs和S2-sEVs对血细胞核繁殖和巨噬血细胞核极化的性别差异改善
04、S1-sEVs和S2-sEVs朝后肢血管痉挛中的区别调低
MSC及衍生产品的sEVs实现促进会新血液的成型放前肢血栓壁痉挛冶疗中被普遍通讯报道，以便检查S1-sEVs和S2-sEVs对血液出现和血栓壁痉挛公司二次利用的影晌，实现一侧股冠脉结扎建设了小鼠后肢血栓壁痉挛绘图。数据揭示与S1-sEVs不同之处，S2-sEVs具体表现出好的促血液出现特征参数，造成 血栓壁痉挛介导板材损害后后肢更快的全复原和二次利用（图5a-o）。
图5：S1-sEVs和S2-sEVs对后肢脑供血不足的其他方法作用
05、S1-sEVs和S2-sEVs在面部皮肤伤口发炎消退中的功用
MSC和其诞生的sEV及其在技术、患处、烧伤或心脏病病致使的造成 患处康复中的用途而被包括广泛性科学论述。要查看分开的sEVs亚群对造成 患处康复的决定，本科学论述树立打了个个包括深部2度烧伤的大鼠三维模型。最终得出结论S2-sEVs经由对糖酵解的关键决定对造成 患处康复特征出更加非常有益的决定（图6a-p）。
图6：S1-sEVs和S2-sEVs对皮肤好创口伤口修复的各种作用
06、S1-sEVs和S2-sEVs对DSS分析的乙状结肠炎的有差异制疗视觉效果
笔者发掘S1-sEVs和S2-sEVs对巨噬细胞膜化学性质的相互影响调后续，仍然在小鼠乙状小肠炎对模型中评价同旁内角的免疫力调功能模块。最后阐述了S1-sEVs开展DSS诱导性的乙状小肠炎的特男人（图7a-s）。
图7：S1-sEVs和S2-sEVs对白色皮肤手术伤口伤口愈合的有所不同影响力
07、sEVs的两个亚群中菌物引发的文化差异干预
ESCRT依靠性路经和非ESCRT性路经都建议sEV的菌物發生。在某项实验中，我们感觉了sEVs标准物在S1-sEVs和S2-sEVs中的差别传达。EGFR是精选内吞路经中已开发的HGS底物，一直以来在S1-sEVs和S2-sEVs泉河就可以观察分析到EGF蛋清，但在S1-sEVs中EGFR泛素化质量要高得多，HGS在将泛素化货件优化到S1-sEVs中起至关重要使用，确认建设方案HGS敲除癌细胞系感觉HGS的缺乏帮助S1-sEVs的菌物發生显长避免，但对S2-sEVs的引发基本上不能作用，反映S1-sEVs和S2-sEVs确认有所不同的调新机制分沁，各分为通常是指ESCRT依靠性和ESCRT非依靠性路经（图8a-t）。
图8：sEVs的俩个亚群互相海洋生物突发的文化差异调节器
二、一篇文章总结ppt
本研究使用TFF和SEC从人MSC中分离的两个sEV亚群在大小、膜标志物或携带物上表现出差异，并探究不同的sEVs亚群代表了MSCs的不同生物学功能。利用蛋白酶组学，miRNA测序及基因敲除，模型构建等分子生物学实验表明了高度表达CD9、HRS和GPC1的S1-sEVs表现出更大的免疫调节作用，而富含CD63和FLOT1/2表达的S2-sEVs在促进细胞增殖和血管生成方面具有增强的能力。这些差异归因于它们包含的特定蛋白质和miRNA。进一步研究显示，两个不同的sEVs亚群对应于不同的生物过程：ESCRT通路（S1-sEVs）和以脂质筏（S2-sEVs）为代表的ESCRT非依赖性通路（图9）。这种方法可能为各种MSC适应症的靶向治疗干预提供优势。
图9：sEVs亚群的生物技术制作而成忽略于多种的細胞内行业
三、拜谱总结ppt
该研究使用TFF-SEC系统从人脐带间充质干细胞中规模化生产不同的sEVs亚群，并且鉴定和表征了两种不同的sEVs亚群，S1-sEVs和S2-sEVs，它们在生物发生、特征和携带物含量方面有所不同。这些差异导致了它们生物学功能的变化。虽然MSC衍生的SEV因其临床潜力而备受关注，但该研究引入了一个新概念，即利用这些不同的MSC sEVs亚群对特定疾病进行靶向治疗。拜谱生物为该研究提供了蛋白酶组学检测分析服务，拜谱生物可提供完善成熟的转录组学、蛋白组学、代谢组学以及多组学联合产品技术服务体系，助力发表高分文献，欢迎致电咨询！
决定性论文文献：
LiuW, Wang X, Chen Y, Yuan J, Zhang H, Jin X, Jiang Y, Cao J, Wang Z, Yang S, Wang B, Wu T, Li J. Distinct molecular properties and functions of small EV subpopulations isolated from human umbilical cord MSCs using tangential flow filtration combined with size exclusion chromatography. J Extracell Vesicles. 2025 Jan;14(1):e70029. doi: 10.1002/jev2.70029. PMID: 39783889; PMCID: PMC11714183
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