肉的宰后嫩化关键归因于肌原化学氯纶成分的毁损，肌原化学氯纶成分是由内源性血清血清酶质水解不起作用酶生物分解肌原化学氯纶和神经癌受损组织细胞系骨架血清造的。与两百多年来始终是加关注大家都讨论的钙血清酶不同的，胱天血清酶（caspases）之前拥有感爱好时题。胱天血清酶在神经癌受损组织细胞系凋亡的制定阶段性起着尤为关键的的的功效，这当中caspase-3在去世血清血清酶质水解不起作用中的功效是各个面和冗杂的，于是不错进的一步研发。S-亚硝基化能够上下跌整钙挥发、能量转换代谢转化、血清质生物分解和神经癌受损组织细胞系凋亡来上下跌整肉嫩，涉及嫩度和持水程度。前中期研发会发现S-亚硝基化可不可以下跌依靠线粒体的caspase-3级联不起作用，这可能性是相关肌肉神经癌受损组织细胞系凋亡和鸡肉品级发生改变的缘由。caspase-3的研发着重是其与神经癌受损组织细胞系凋亡的的关系，但，少许有研发试论S-亚硝基化上下跌整caspase-3的策略。

2024年9月由合肥农林牧大专张万刚教导微商团队在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章，研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低（P < 0.05），并表现出剂量依赖性的抑制作用，其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化，进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱菌物为该研究提供了亚硝基化掩盖组学拜谱生物，助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。

中文名字问题：体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响

期刊论文：Journal of Agricultural and Food Chemistry

2026年反应成分：5.7

发稿时段：2024年9月

消费者方：南京农业大学

研发原料：蛋白

拜谱作为技木：亚硝基化修饰组学

水平路径：

一、钻研报告

01.Caspase-3化学活化

现阶段尚不弄清楚NO对caspase-3的克加工用是不是归因于NO介导的S-亚硝基化，的不同浓硫酸浓度等度的GSNO成为外源性NO生产，以引发caspase-3的离体S-亚硝基化。结杲表达，与不能GSNO的组比起，100、200和400μM GSNO组的caspase-3亲水性重要调低（图1），与前者媒体报道同步。GSNO处里调低caspase-3亲水性的隐藏原由仍进一步说明。

图1 不相同氨水浓度的GSNO净化处理对caspase-3特异性的后果

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

02.Caspase-3的S-亚硝基化程度较

调查Caspase-3的亚硝基化限度，以展现GSNO对Caspase-3的作用性。经GSNO处理后，验测到caspase-3蛋清S-亚硝基化比强度曾加（图2）。这类导致说明，外源性GSNO塑造可实现目标帮助caspase-3的身体外S-亚硝基化。可笑惊呆的是，在不存在的GSNO存在的的差表组中验测到其中一个细小的S-亚硝基化带，这说明caspase-3也许 形成内源性的S-亚硝基化。与此同时，本调查中caspase-3的S-亚硝基化限度较高，而caspase-3的活力下降，这与前面的调查一样的。以至于，caspase-3的特情人S-亚硝基化修饰语位点尚不知道，还需进两步的经历。

图2 GSNO清理对caspase-3S-亚硝基化程度的关系

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

03.Caspase-3的S-亚硝基化位点

通过亚硝基化绘制组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明，caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰（图3）。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中，分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶，其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化，说明Caspase-3易受亚硝基化修饰（图4）。此外，据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163，这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断，半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的，这可能影响蛋白降解，促进死后衰老。

图 3 caspase-3的回文队列。暗蓝色符号符号的回文队列觉得S-亚硝基化肽，红色的符号符号的C觉得S-亚硝基化半胱氨酸

(图源：Hou, Qin et al., JAgric Food Chem.. 2024)

图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱仪

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

04.S-亚硝基化Caspase-3吸附结球蛋白

结淀粉酶充当一项比较重要的的神经元骨架淀粉酶，在能维持肌神经元组成部分的组成部分全部性和做收缩性这方面起特别要的使用，分析S-亚硝基化caspase-3对结淀粉酶光可降解的敏感度性含有比较重要的重大意义。与Std（未用胱天淀粉酶酶-3和GSNO孵育的初始值肌棉植物纤维淀粉酶）组优于，0 μM GSNO组（肌原棉植物纤维和caspase-3的孵育，无GSNO）的全部结淀粉酶含磷量正相关削减，显示信息caspase-3对结淀粉酶含有风险的淀粉酶蛋清质水解效率。在GSNO孵育后，全部结淀粉酶的含磷量严重加入（P < 0.05）。于此，当GSNO浓度值增高时，全部结淀粉酶的含磷量持继调整（P < 0.05）（图5）。相应发展是因为，SNO呈现的caspase-3以能力依赖于的方试减缓结淀粉酶的光可降解。

图5.S-亚硝基化caspase-3降解塑料结淀粉酶

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

05.S-亚硝基化Caspase- 3可降解肌钙蛋清-T

肌钙淀粉酶-T (TnT)是原肌球淀粉酶设定开展相关肌肉收縮的丝条的也要肌原玻璃棉棉纤维淀粉酶。TnT的吸附塑料功能是的检查到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化必备条件下，caspase-3对TnT的吸附塑料现象如图已知6提示，与Std组（不标caspase-3和GSNO的肌原玻璃棉棉纤维）相比较，caspase-3组中30 kDa TnT电影精彩片段的差异性增长，显示caspase-3参与活动了TnT的吸附塑料，除此以外，caspase-3与GSNO的孵育危害30 kDa TnT下跌。在100和200 μM GSNO组区间内未的检查到分明的的差异(P > 0.05)，而当GSNO的酸度起到400 μM 时，该电影精彩片段的差异性增多(P < 0.05)。许多出现 显示了SNO装饰的caspase-3对TnT吸附塑料的抑制作方法用的作用。结淀粉酶和TnT是caspase-3的强烈底物，而GSNO处里降caspase-3的活力性机会危害肌原玻璃棉棉纤维淀粉酶吸附塑料本事降。综合上面的所说，NO诱骗的S-亚硝基化还可以使用装饰半胱氨酸残基来设定caspase-3的活力性，而使进1步危害其对结淀粉酶和TnT的淀粉酶蛋白质水解本事，于是危害牛肉片质量。

图6. S-亚硝基化caspase- 3分解肌钙蛋白质-T

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

二、工作小结

本分析广泛宣传一起探讨S-亚硝基化对caspase-3淡化的影向简述接着随后对牛羊肉片肌原植物纤维材料离体可降解的影向。血清S-亚硝基化可能淡化caspase-3的半胱氨酸残基，关键在于引起caspase-3可溶性有效降低，进步阻止了其对牛羊肉片肌原植物纤维材料血清的血清淀粉水解程度。

三、拜谱个人心得体会

定量分析通过了酶活测量，亚硝基化突显组学定量分析，WB等检则策略，表明淀粉酶质S-亚硝基化不错突显caspase-3的半胱氨酸残基，这致使了caspase-3催化活性的拉低，齐头并进一步骤可以抑制了其对羊肉肌原植物纤维淀粉酶质的淀粉酶质电离效率。本定量分析为解释清楚淀粉酶质质亚硝基化对色泽的房产调控机制化出具没事个新的感觉。

拜谱生物作为一家国内领先的多组学服务公司，可提供完善成熟的血清质组学、装饰血清质组学、排泄组学、转录组学等多组学产品技术服务体系，整合多组学数据进行深入挖掘分析，全面解析机制机理等，助力高分文章发表。除此之外，拜谱生物还可提供半胱氨酸系类软件，包括亚硝基化、谷胱甘肽化、硫巯基化、次磺过酸、total空气氧化重现、游离态巯基，欢迎大家咨询！

参考使用医学文献：

Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663